熒光分光光度計(jì)采用150W濱松高品質(zhì)氙燈和高性能光電倍增管,具有高檢測靈敏度、高測試速度、人性化的多功能控制和分析的操作軟件,高速掃描時(shí)1秒內(nèi)即可完成全譜掃描、計(jì)算和測量,其專業(yè)軟件包含多種分析功能,豐富的附件大大擴(kuò)展儀器的應(yīng)用范圍,可支持液態(tài)、粉末、薄膜樣品的測量,既可對產(chǎn)生熒光互淬滅的高濃度樣品實(shí)現(xiàn)測量,也可對少至5μl的微量樣品實(shí)現(xiàn)測量,并可配備自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)等等。
熒光強(qiáng)度容易受外界因素的影響,如樣品池、激發(fā)光源、溫度、溶液的pH值、溶劑性質(zhì)、其它溶質(zhì)、表面活性劑等都會(huì)造成熒光強(qiáng)度的變化。嚴(yán)格控制測試條件對熒光分析來說至關(guān)重要。
?、贅悠窇?yīng)盛在四面透光的石英比色皿(熒光池)中,如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池。
?、谠跓晒夥治鰰r(shí),為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù),一般需要開機(jī)預(yù)熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,預(yù)熱時(shí)間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質(zhì),盡量采用長波長、低人射光強(qiáng)度及短時(shí)間光照。
③溫度變化可引起熒光強(qiáng)度的改變。通常降低溫度,有利于提高熒光量子產(chǎn)率,熒光強(qiáng)度增大。溫度影響熒光強(qiáng)度的顯著程度因樣品而異,大部分熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度受溫度影響不大,測試溫度變化不超過±3℃,對測試結(jié)果幾乎無影響。
④當(dāng)熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時(shí),溶液的pH對熒光強(qiáng)度有較大影響。因?yàn)槿跛峄蛉鯄A在不同酸度中,分子和離子的電離平衡會(huì)發(fā)生改變,而熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度會(huì)因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。以苯胺為例:在pH=7~12的溶液中會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色熒光,在pH<2或ph>13的溶液中都不產(chǎn)生熒光。再如,維生素B2(核黃素)在430~440nm藍(lán)光照射下會(huì)發(fā)出綠色熒光,λem為535nm。它在pH=6~7的溶液中熒光強(qiáng)度最大,而在pH=11時(shí)熒光消失;但在堿性溶液經(jīng)光線照射發(fā)生分解作用或在酸性KMn04氧化下都會(huì)生成熒光強(qiáng)度比維生素B2強(qiáng)得多的黃光素,并可溶于氯仿。利用此性質(zhì)可提高測定的靈敏度和選擇性。
?、莘肿咏Y(jié)構(gòu)中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中,熒光效率顯著增強(qiáng)。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強(qiáng)度。
?、奕鹄⑸浜屠⑸涫侨軇┑膬煞N散射光,應(yīng)注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當(dāng)做熒光光譜。瑞利散射光波長與激發(fā)光波長相同,拉曼散射與激發(fā)光波長不同,而熒光物質(zhì)的熒光波長與激發(fā)光波長無關(guān),因此可以通過選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)波長將拉曼散射光與熒光分開。在測試時(shí)選擇合適的狹縫寬度,或者空白扣除,也可以對散射光的影響進(jìn)行校正。
?、邿晒馕镔|(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導(dǎo)致熒光強(qiáng)度降低,常見的熒光猝滅劑,如鹵素離子、重金屬離子、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現(xiàn)象,因此,在較嚴(yán)格的熒光實(shí)驗(yàn)中必須除02。
?、鄿y試過程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看,以防對眼睛造成損傷。
?、醿x器房應(yīng)注意經(jīng)常通風(fēng),避免產(chǎn)生的臭氧在室內(nèi)富集。